生化分析儀酶測試不準(zhǔn)確原因分析

文章來源：發(fā)布時間：2019年03月05日瀏覽量：次 字體： 大 中 小

在生化分析測量中，酶的測定比較復(fù)雜，要求條件較高，測試比較困難。一般生化分析儀只要酶的測定準(zhǔn)確，重復(fù)性好，其它項目的測定一般都會沒有問題。現(xiàn)就生化分析儀酶分析中常見的測試不準(zhǔn)確、重復(fù)性差的幾點原因進行分析，以供使用者和維修工程師參考。

生化分析儀酶的測定一般用動力學(xué)法進行測試，其原理是在酶反應(yīng)的最適條件下，用物理、化學(xué)或酶促反應(yīng)的分析方法，在反應(yīng)速度恒定期（零級反應(yīng)期）來連續(xù)觀察和記錄一定反應(yīng)時間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時間酶反應(yīng)初速度計算出酶活力的大小和代謝物的濃度。零級反應(yīng)期，指反應(yīng)速度與底物濃度的零次方成正比，也就是與底物濃度無關(guān)。在零級反應(yīng)期期間整個反應(yīng)過程中，反應(yīng)物可以勻速地生成某個產(chǎn)物，導(dǎo)致被測溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（ΔA/min）與被測物的活性或濃度成正比。計算方法有兩種：

1）絕對法：

酶活力(U/L)＝ΔA×(反應(yīng)液體積/樣品體積)×(1000/消光系數(shù))

2）相對法：

(U/L或mmol/L)＝［ΔA(測定)/ΔA(標(biāo)準(zhǔn))］×標(biāo)準(zhǔn)物的活力或濃度

因此，生化分析儀酶的測定與許多條件有關(guān)。條件的設(shè)置，如：波長（單波長、雙波長）、溫度、參數(shù)、測試方法，延遲和測試時間，吸液量等。另外還與廠家的試劑，樣品的采集、保存有關(guān)，同時與及時進行質(zhì)控，從一個樣品進入另一個樣品測試時及時清洗也有很大關(guān)系。

例如GPT的測試一般選擇為：波長為340nm，測定時間為20秒，延遲時間為40秒，吸液量為350μl，溫度設(shè)定為37℃，試劑空白可任意選擇。

因此GPT的測試結(jié)果與以下幾點有關(guān)：

1、340nm為波長低端，能量較低，同時340nm濾光片使用較多，易老化。所以波長漂移不準(zhǔn)，半寬度變化都會影響測量的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

2、動態(tài)法測試有延遲時間，測試時間要求。延遲時間在動態(tài)法中為預(yù)反應(yīng)時間，測試時間在動態(tài)法中為測試的總時間。零級動力學(xué)法是針對特定時間段而言的，酶反應(yīng)剛啟動時反應(yīng)比較復(fù)雜，雜反應(yīng)較多，必需經(jīng)過一段延遲時間才能進入穩(wěn)定反應(yīng)期，各試劑商對這兩段時間有嚴(yán)格規(guī)定。所以動態(tài)法測試一般溫度在37℃，延遲時間不少于15秒為好。

3、對于參數(shù)的輸入應(yīng)按試劑要求輸入其給定值，一般試劑商在試劑盒說明書中給予說明。

4、反應(yīng)溫度。

5、測試空白要準(zhǔn)確。

6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測量的重復(fù)性，建議測試污染性大的物質(zhì)試劑量應(yīng)相應(yīng)增加。一般應(yīng)大于400μl，一般項目為500μl即可。

7、測試不準(zhǔn)確、重復(fù)性差從操作上看主要有：儀器本身原因如比色杯中有氣泡；光源燈老化；光源電壓不穩(wěn)；340nm濾光片性能變差，透射性變小；波長不準(zhǔn)確等有關(guān)。一般檢查液路接口是否松動漏氣，更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決。至于電路問題，加熱元件損壞，溫度不受控的問題只能由工程師解決。

總之酶的測定影響準(zhǔn)確度的因素很多，只要認(rèn)真操作，綜合分析影響測定的各項因素，認(rèn)真分析，酶測定的問題不難解決的。根據(jù)我們的經(jīng)驗只要試劑、樣品準(zhǔn)確，保存得當(dāng)，樣品預(yù)處理仔細(xì)，儀器經(jīng)常維護、保養(yǎng)，認(rèn)真操作，問題會自行解決。