凝聚胺法交叉配血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

文章來源：發(fā)布時(shí)間：2013年08月20日瀏覽量：次 字體： 大 中 小

1. 原理

凝聚胺（polymatching）法首先利用低離子介質(zhì)降低溶液的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽(yáng)離子云，促進(jìn)血清（漿）中的抗體與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，再加入帶亞電荷的高價(jià)陽(yáng)離子多聚物-凝聚胺溶液，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短細(xì)胞間距，形成可逆的非特異性聚集，并使IgG型抗體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液后，僅由凝聚胺引起的非特異性聚集，會(huì)因電荷中和而分散，而由抗體介導(dǎo)的特異性凝集則不會(huì)分散。

2. 標(biāo)本采集：

2.1 標(biāo)本種類：抽取靜脈血3-4ml待凝固后分離血清，將細(xì)胞配成5％鹽水懸液將供血者血樣以同樣方法分離血清(漿)和紅細(xì)胞懸液。

2.2 標(biāo)本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主張用EDTAK2（mg/dz）抗凝標(biāo)本應(yīng)無溶血，切標(biāo)簽齊全。

3. 標(biāo)本儲(chǔ)存：急診標(biāo)本30分鐘內(nèi)完成操作，標(biāo)本應(yīng)至4℃冰箱保存7天。

4. 標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸。

5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染。溶血標(biāo)本，標(biāo)簽不齊全不能作測(cè)定。

6. 試劑：

6.1 試劑名稱：凝聚胺試劑(polymatching)

6.2 試劑生產(chǎn)廠家：(臺(tái)資)珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

6.3 試劑組成：

試劑1. 低離子介質(zhì)(LowLonic Medium，LIM).試劑打開使用后，可置室溫貯存，未開封者2-10度貯存，有效期為2年。

試劑2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).貯存及有效期同上。

試劑3. 重懸液(ResuspendingSolution).貯存及有效期同上。

試劑4. 8.5％生理鹽水。

7. 儀器：

7.1 血型血清索離心機(jī)：XTL-4.7   上海離心機(jī)械研究所

7.2 離心機(jī)：上海手術(shù)器械廠

7.3 電熱恒溫水箱：北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠

7.4 顯微鏡：OLYMPUS(日本)

8. 操作步驟及結(jié)果判斷：

8.1 供受者紅細(xì)胞用生理鹽水配成3-5％的細(xì)胞懸液。加樣量均為：血清2滴，紅細(xì)胞懸液1滴。主管：受血者血清+供者紅細(xì)胞懸液;次管：受者紅細(xì)胞懸液+供者血清;(陰陽(yáng)對(duì)照管另設(shè))。

8.2 各管分別加低離子介質(zhì)0.6ml混勻置室溫1分鐘。加凝聚胺溶液2滴，混勻，置室溫15秒。

8.3 1000g(3000rpm)，離心18秒，棄上清液，管底保留約2滴液體。輕搖試管，觀察是否形成凝塊。如未形成凝塊，則重做前面試驗(yàn)。

8.4 加入2滴重懸液，輕輕混合，肉眼或顯微鏡下觀察結(jié)果。

8.5 凝塊在1分鐘內(nèi)分散，試驗(yàn)結(jié)果為陰性，供受者血液配合;反之，如依照為不同強(qiáng)度的凝塊，試驗(yàn)結(jié)果判為陽(yáng)性，供受者血液不配合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須在3分鐘內(nèi)判讀。

9. 操作性能： 快速簡(jiǎn)便，特異性強(qiáng)，靈敏度較高，重復(fù)性好。

10. 超出范圍結(jié)果處理：

10.1 細(xì)胞自凝： 在冬天氣溫較低時(shí)，某些病人血清中含有冷凝集素而導(dǎo)致交叉配血假陽(yáng)性;遇此現(xiàn)象可用37℃-40℃生理鹽水洗滌紅細(xì)胞并置37℃水溶中輕輕搖動(dòng)，觀察結(jié)果。

10.2 若病人血清(血漿)含有肝素，如洗腎患者能影響配血，須多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。

10.3 紅細(xì)胞懸液為5％為宜，過濃或過淡可使抗原抗體比例不適當(dāng)，反應(yīng)不明顯易誤判。

10.4 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體。

11. 方法局限性：

11.1 試管，滴管吸頭和玻片必須清潔干燥，防止溶血。

11.2 操作方法應(yīng)按規(guī)定，先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。

11.3 離心時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。

11.4 觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集，繼發(fā)性凝固及線狀排列的區(qū)別。