生化分析儀酶測試不準確原因分析

文章來源：發布時間：2013年09月11日瀏覽量：次 字體： 大 中 小

生化分析儀酶測試不準確原因分析

       在生化分析測量中，酶的測定比較復雜，要求條件較高，測試比較困難。一般生化分析儀只要酶的測定準確，重復性好，其它項目的測定一般都會沒有問題。現就生化分析儀酶分析中常見的測試不準確、重復性差的幾點原因進行分析，以供使用者和維修工程師參考。
       生化分析儀酶的測定一般用動力學法進行測試，其原理是在酶反應的最適條件下，用物理、化學或酶促反應的分析方法，在反應速度恒定期（零級反應期）來連續觀察和記錄一定反應時間內底物或產物量的變化，以單位時間酶反應初速度計算出酶活力的大小和代謝物的濃度。零級反應期，指反應速度與底物濃度的零次方成正比，也就是與底物濃度無關。在零級反應期期間整個反應過程中，反應物可以勻速地生成某個產物，導致被測溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（ΔA/min）與被測物的活性或濃度成正比。計算方法有兩種：
       1）絕對法：
       酶活力(U/L)＝ΔA×(反應液體積/樣品體積)×(1000/消光系數)
       2）相對法：
       (U/L或mmol/L)＝［ΔA(測定)/ΔA(標準)］×標準物的活力或濃度
       因此，生化分析儀酶的測定與許多條件有關。條件的設置，如：波長（單波長、雙波長）、溫度、參數、測試方法，延遲和測試時間，吸液量等。另外還與廠家的試劑，樣品的采集、保存有關，同時與及時進行質控，從一個樣品進入另一個樣品測試時及時清洗也有很大關系。
       例如GPT的測試一般選擇為：波長為340nm，測定時間為20秒，延遲時間為40秒，吸液量為350μl，溫度設定為37℃，試劑空白可任意選擇。
       因此GPT的測試結果與以下幾點有關：
       1、340nm為波長低端，能量較低，同時340nm濾光片使用較多，易老化。所以波長漂移不準，半寬度變化都會影響測量的準確度和重復性。
       2、動態法測試有延遲時間，測試時間要求。延遲時間在動態法中為預反應時間，測試時間在動態法中為測試的總時間。零級動力學法是針對特定時間段而言的，酶反應剛啟動時反應比較復雜，雜反應較多，必需經過一段延遲時間才能進入穩定反應期，各試劑商對這兩段時間有嚴格規定。所以動態法測試一般溫度在37℃，延遲時間不少于15秒為好。
       3、對于參數的輸入應按試劑要求輸入其給定值，一般試劑商在試劑盒說明書中給予說明。
       4、反應溫度。
       5、測試空白要準確。
       6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測量的重復性，建議測試污染性大的物質試劑量應相應增加。一般應大于400μl，一般項目為500μl即可。
       7、測試不準確、重復性差從操作上看主要有：儀器本身原因如比色杯中有氣泡；光源燈老化；光源電壓不穩；340nm濾光片性能變差，透射性變小；波長不準確等有關。一般檢查液路接口是否松動漏氣，更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決。至于電路問題，加熱元件損壞，溫度不受控的問題只能由工程師解決。
       總之酶的測定影響準確度的因素很多，只要認真操作，綜合分析影響測定的各項因素，認真分析，酶測定的問題不難解決的。根據我們的經驗只要試劑、樣品準確，保存得當，樣品預處理仔細，儀器經常維護、保養，認真操作，問題會自行解決。