論文匯編高中風險地區大規模篩查新冠核酸檢測經驗分享
一區試劑配制
試劑配制是核酸檢測的第一步，也是全流程完善完備的起跑線，決定了后續工作的有效性。
（一）時間及流程優化建議
氣模實驗室每天的檢測任務一般是4-8萬管，因此，試劑配制工作量非常大，節約時間、提高效率是很重要。可以從以下幾方面節約時間：
1.擴增試劑的提前解凍。現場后勤工作人員可以根據標本量，在核酸檢測人員到達場地的1-2小時前將一定比例的擴增試劑放置室溫，提前解凍。
2.擴增試劑的反應液與酶可以數支按照正確比例同時倒入50ml離心管中進行混勻，而不是分別混合混勻。這樣可以節約開蓋擰蓋的次數，減少污染，省時省力。
3.使用全自動液體工作站進行自動分液，而不是使用排槍分液。排槍分液操作要求高，連續使用移液器槍頭會松動，易導致分液體積不準。使用全自動液體工作站省時、省力、精準度高。
（二）注意事項
1.試劑配制的量盡可能與檢測量齊平。試劑配制后，放置時間過久，將導致酶失活，出現假陰性；以及探針斷裂致使熒光基團和淬滅基團游離，擴增出現假的單基因起跳情況。在人員充足的情況下，可以安排專人在一區根據實際檢測量進行動態的試劑配制。
2.動作輕柔，嚴防人源性污染。物品進入一區前，應該消毒。盡量減少未被防護裝備遮蓋的身體部位直接與一區內物品接觸。試劑混合、分液、分裝動作都應輕柔，手套避免接觸管口、管蓋等部位。
二區樣本制備
樣本制備是核酸檢測中工作量最重、最繁瑣的一個區域，人員多、崗位多、設備雜、空間擁擠。樣本制備的每一個步驟都至關重要。
（一）時間及流程優化建議
1.由于崗位復雜，建議各個崗位的人員相對固定，可以降低失誤率。
2.標本接收后，需震蕩混勻，10混1管和20混1管需適當延長震蕩時間。震蕩完成，靜置5分鐘后，再進行加樣，減少開蓋時的液體飛濺和氣溶膠污染。
3.每行標本的首尾應使用標記筆進行標記和編號。
4.如果加樣錯誤，如果能明確知道加樣錯誤位置，在布板單上標注清楚；如不明確，需整板重做。
5.加樣完成后，標本的擺放：可按照加樣人的不同分開擺放。在標本架上用便簽紙粘貼板號以及加樣人-加樣板信息，如“某某-1”，以方便查找。同時，流轉單上也需標注。
6.標本的丟棄：整板標本結果上傳完畢，由三區核對后發出指令，二區人員方可丟棄標本（每板標本分別打包丟棄，黃色小垃圾袋外標注板號）。如遇某板標本中有復查標本，此板標本需暫存，直至復查完畢。
7.復查需單獨布板，且相鄰位置盡量不同時加陽性復查標本。
（二）注意事項
1.核酸提取過程所有的試劑（裂解液、洗滌液、磁珠、洗脫液等）都應屬于同一批號，寫上板號和順序號，且標記的位置朝向一致。
2.如因試劑順序擺放錯誤導致無擴增結果，需整板重做。
3.提取試劑使用前需抽樣檢查底部是否有結晶形成，胍鹽結晶可導致磁珠吸附和釋放效能降低，造成核酸提取失敗。如因為氣溫太低導致的結晶，需37攝氏度復溫，其他原因導致的結晶，需更換試劑。
4.提取完成后，若發現磁棒套殘留磁珠過多，以及洗脫液內殘留磁珠，此臺提取儀應停用，聯系儀器工程師。
5.點樣和貼膜/加蓋崗位，尤其需注意手套導致的攜帶污染，需常更換或消毒。
6.若加樣人員發現采樣管內無拭子，一律按退單處理（環境采樣除外）。
7.上機前需將96孔板瞬時離心后方可上機擴增，如疊放，需考慮離心力是否會將遠端板的貼膜擠壓，導致密封性降低。
三區擴增及分析
由于氣膜實驗室內的PCR擴增儀可能品牌和型號眾多，擴增區工作人員應對不同PCR擴增儀都有一定的了解，進艙前熟悉操作。擴增區的操作人員，應當熟練掌握熒光PCR的原理、CT值的意義、基線的調整、陰陽性質控的意義、結果的判讀等，且細心、謹慎。
（一）時間及流程優化建議
1.陽性或弱陽性結果，需雙人確認，雙簽字。
2.每批復查的布板單和原始單都應匯總在一起，簡單裝訂，方便核實。
3.原始單最下面結果分析部分，應該對該板結果進行總結，如“全陰”、“1個內標未起復查”、“1個雙陽復查”、“1個單陽復查”等，并簽名，以便結果錄入。
（二）注意事項
1.注意擴增儀的熒光信號收集方式，是側面掃描或頂部掃描。如側面掃描，則不能使用不透明的擴增管。如果頂部掃描，則不能使用硅膠蓋板或不透明/磨砂的八連管蓋。
2.所有的擴增管上機前，需再次確認每個管管蓋嚴密性。
3.擴增儀上機后，需標注陰性和陽性質控位置，其余的樣本孔需編號，與布板單一致。
4.盡量在程序結束、冷卻后再打開擴增儀熱蓋，防止爆蓋。
5.結果分析時，不同的試劑尤其需要注意各個通道代表的是哪種靶基因，不能混淆。
6.結果分析時，如擴增曲線出現斜線、非正立的S型曲線等情況，需注意查看原始曲線，并調整基線，重新分析。
7.不同的試劑進行同一管陽性標本復查時，兩者CT值的差距需要在合理范圍內（根據程序設置方式、點樣量、總體積等提前計算）。
8.出現非常靠后的單基因起跳，無論說明書是否已經判斷為陰性，都應該進行雙試劑復查。在病例較多的地區，患者呼吸道排毒量個體差異較大，非常靠后的單基因起跳，可能是少量排毒期，排除污染后，可上報可疑。
9.有效控制艙內溫度，多臺擴增儀散熱量巨大，應減少由于環境溫度過高導致擴增儀損壞。
各區域交流環節
各區之間的交流是很重要的，下面對各區都需注意或涉及到的注意事項進行總結。
1.擴增試劑在點樣前和點樣后，都應該避免紫外線的照射，盡量避光。
2.每一板標本的流轉都應該隨時攜帶流轉單，流轉單上應標注板號、加樣人-加樣板如“某某-1”、提取人、提取儀編號、擴增上機人、擴增儀編號、結果分析人員等信息。
3.各區域之間盡量減少不必要的人員、物品流動。尤其避免人員和物品的逆向流動。如需流動，需做好消殺、嚴防產物污染。
4.如出現某一板有多個內標不出的情況，先確定是否為環境樣本，檢查采樣管的基本情況。再通知二區將標本再次震蕩后，更換加樣人整板重新加樣、更換提取儀提取、更換擴增儀進行擴增。如情況仍然未得到改善，可通知重新采樣。
5.若初篩出現雙陽標本，原管復查后變成陰性，應找出原始板，整板進行復查。
6.75%酒精能殺滅新冠病毒，防止生物危害，但是并不能有效防止產物污染，且易燃易爆。因此，杜絕核酸產物污染，盡可能使用含氯消毒液或核酸清除劑。
7.如大量標本出現ORF1ab或N基因翹尾，應先考慮核酸產物污染，實驗室暫停使用。使用含氯消毒液或核酸清除劑進行全面消殺，尤其是一些隱秘位置，如試劑儲存箱、冰箱門把手、提取儀及全自動分液工作站屏幕、排槍等。進行實驗室內環境樣本檢測、無標本空白對照等多次試驗，無污染后方可重新投入使用。
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