檢驗質控新冠核酸檢測過程中無內參的原因分析
核酸檢測是新型冠狀病毒確診和篩查的重要手段，也是常見的實驗室檢測方法之一，并且它是目前能較早確定是否感染病毒以及早發現和早治療最有效的檢測方法。核酸檢測陽性可以作為新型冠狀病毒感染確診的金標準。
對于新型冠狀病毒的核酸檢測過程中樣本的采集、保存、轉運，樣本核酸的提取和擴增檢測、結果的判讀均須嚴格按照要求進行。但在核酸檢測的過程中不可避免的出現一些影響檢測結果的細節問題，其中最令人頭痛的是基因檢測擴增結束以后，在結果判讀的時候發現檢測樣本沒有內參。通常可以發生個別孔沒有內參，也有整板都沒有內參的情況。
內參，其實就是內參基因，它是實時熒光定量PCR中的內參基因，通常是一段與靶序列共同擴增的非靶序列分子，因此能夠對樣本的檢測環節進行監測，是核酸檢測質量的重要指標之一。內參主要分為內源性內參和外源性內參。目前應用較多的核酸檢測試劑盒主要為內源性內參。
內源性內參是人體的管家基因，在人的各組織和細胞中表達相對恒定，因此也可以通過采集的鼻咽拭子等標本獲取。由于與樣本中的靶基因經歷完全相同的處理程序，因此可以監控新冠核酸檢測的全流程，包括采樣、保存運輸、樣本提取、擴增等過程。
在進行核酸檢測時，如果內參有曲線，絕大多數情況下說明采樣運輸、提取及擴增沒有問題。反之，如果內參沒有曲線，無論目的基因是否有曲線，說明核酸檢測的整個過程中某個環節出現了問題，核酸檢測結果是不可信的，容易造成假陰性。即進行核酸檢測的時候“有內參不一定行，但無內參一定不行”。需要查找到原因后重新進行檢測。
內源性內參無曲線為實驗中常見的異常結果之一，通過查閱資料和實踐經歷，對沒有內源性內參的原因總結有以下幾個方面：
一、采樣環節
新冠病毒感染人體之后，首先會在呼吸道系統中進行繁殖，因此醫護人員可以通過使用拭子刮取受檢者鼻咽部的組織和分泌物，然后將拭子頭部折斷，放進合格的病毒保存液中保存、運輸，最后送到實驗室進行核酸檢測。如果采樣部位和方法不達標，可能采集不到或者采集到不足量的人體組織和細胞，就會造成檢測結果沒有內參。
同時，如果進行環境和物體表面的核酸檢測的時候，因為環境中和物體表面通常不會有大量的人體組織和細胞，達不到核酸檢測的拷貝數，可能檢測結果也不會有內參，這種情況是正常的。
二、保存運輸環節
獲得患者樣本后，需盡快進行檢測，標本采集后室溫放置不超過4小時，應在2-4h內送到實驗室。如無法立即檢測需要轉運的樣本，應按照說明書的要求，采用干冰等制冷方式進行保存，嚴格按照相關規定包裝運輸，并送到實驗室進行檢測。如果標本保存不當，造成核酸降解，也會造成無內參的情況。
三、核酸提取環節
1、加樣前樣本沒有充分震蕩混勻，病毒保存液中的基因濃度不均一，可能造成加樣時核酸濃度不足。
2、向裂解板中加樣本時漏加或者加串孔。
3、提取儀上的各個試劑板的順序或者方向擺放錯誤，也包括不同提取儀之間的試劑板用串。
4、提取前磁珠未充分混勻以及未安裝使用磁棒套。
5、各提取試劑在儀器上準備好以后沒有運行，一段時間后直接將洗脫板卸下，送到擴增環節。
6、提取儀發生故障等。
四、基因擴增環節
1、反應液配置不合格或者試劑反復凍融，造成反應液失效。
2、反應孔中漏加反應液。
3、反應孔中漏加提取液。
4、反應孔中混入酒精、核酸清除劑等。
5、程序操作的時候點錯核酸列或者選錯擴增程序等等。
6、實時定量PCR擴增儀發生故障。
幾個小時的核酸檢測是一個非常漫長的過程，整個過程中的每一個操作環節都有可能影響檢測結果，所以每個環節都應該規范化管理，嚴格按照操作規程來進行。出現樣本內參異常結果時也應細心觀察、耐心分析，查找原因，最終保證核酸檢測的質量。
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